第３９卷第１期 ２０１４年２月 贵 阳 医 学 院 学报 ＪＯＵＲＮＡＬ ０Ｆ ＧＵＩＹＡＮＧ ＭＥＤＩＣＡＬ ＣＯＬＬＥＧＥ ＶＯ１．３９ Ｎｏ．１ ２０１４．２ Ｗｎｔ／［３一连环蛋白在高糖诱导心肌成纤维细胞增殖中 的作用 黄小芳 ，张 韬 ，华 碉 ，赵新军 ，陈红梅 ，刘 彬 一，周迎春 一， 黄桂琼 （１．南方医科大学中医药学院分子生物学实验室，广东广州５１０５１５；２．广州医科大学附属第二医院心血管疾病研究所，广东广州 ５１６００１） ５１０２６０；３．南方医科大学中西医结合医院心内科，广东广州５１０４５０；４．惠州市中医医院心内科，广东惠州［摘 要］目的：探讨Ｗｎｔ／１３．连环蛋白（Ｗｎｔ／１３．ｃａｔｅｎｉｎ）在高糖诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞ＣＦｓ增殖中的 作用。方法：分离新生乳鼠ＣＦｓ，构建高糖（２５ ｍｍｏｌｆＬ）诱导ＣＦｓ增殖细胞模型。采用Ｗｎｔ／１３．ｃａｔｅｎｉｎ抑制剂 ＸＡＶ９３９以及激动剂ＳＫＬ２００１Ｗｎｔ／１３－ｃａｔｅｎｉｎ信号通路。ＭＴＩ＂法和细胞计数检测心肌细胞增殖，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 法检测大鼠ＣＦｓ中３－ｃａｔｅｎｉｎ的表达，实时荧光定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）检测增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达。结果： ２５ ｍｍｏｌ／Ｌ高糖刺激４８ ｈ后ＣＦｓ的细胞增殖显著增加，Ｂ—ｅａｔｅｎｉｎ表达显著升高（Ｐ＜０．０１），ＸＡＶ９３９能抑制ＣＦｓ 增殖（Ｐ＜０．Ｏ１），降低高糖诱导Ｂ．ｃａｔｅｎｉｎ及ＰＣＮＡ的表达（Ｐ＜０．０１），ＳＫＬ２００１能对抗ＸＡＶ９３９抑制高糖诱导 ＣＦｓ增殖的作用。结论：高糖诱导的ＣＦｓ增殖可能与激活Ｗｎｔ／１３－ｃａｔｅｎｉｎ途径有关。 ［关键词］成纤维细胞；心肌；高糖；Ｂ．连环蛋白；增殖细胞核抗原；信号传导 ［中图分类号］Ｒ３６３．２１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１０００－２７０７（２０１４）０１－００３０－０５ Ｔｈｅ Ｒｄｅ ｏｆ Ｗｎｔ／１３－ｃａｔｅｎｉｎ ｉｎ Ｃａｒｄｉａｃ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｈｉｇｈ Ｇｌｕｃｏｓｅ ＨＵＡＮＧ Ｘｉａｏｆａｎｇ ，ＺＨＡＮＧ Ｔａｏ ，ＨＵＡ Ｙｕｅ ，ＺＨＡＯ Ｘｉｎｊｕｎ ，ＣＨＥＮ Ｈｏｎｇｍｅｉ ， ＬＩＵ Ｂｉｎ ，ＺＨＯＵ Ｙｉｎｇｃｈｕｎ ，ＨＵＡＮＧ Ｇｕｉｑｉｏｎｇ ’ （Ｊ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｃｈｏｏｌ ｆ ｏＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｗｉｎｅ ｆＳｏｕｔｏｈｅｒｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０５１５，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ；２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｄｉｓｅａｓｅ，ｔｅ Ｓｅｈｃｏｎｄ Ａｉｌｆｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｆ ｏＧｕａｎｇｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０２６０，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ；３．Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｗａｌ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＳｏｕｔｅｒｈｎ Ｍｅｄｗａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０４５０，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉａ；４．Ｃａｒｎｄｉｏｌｏｇｙ Ｄｅｐａｒｔｅｎｔ，Ｈｕｉｍｚｈｏｕ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｆ ｏＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｅｓｎｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈｕｉｚｈｏｕ ５１６００１，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉａ）ｎ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ ｌ ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ Ｗｎｔ／Ｂ—ｃａｔｅｎｉｎ ｉｎ ｎｅｏｎａｔａｌ ｒａｔ ｃａｒｄｉａｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｎｅｏｎａｔｌ ｒａｔａ ｃａｒｄｉａｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ，ａｎｄ ｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅ（２５ｍｍｏｌ／Ｌ）ｉｎｄｕｃｅｄ ｃａｒｄｉａｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｍｏｄｅｌ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ；Ｗｎｔ／１３一ｃａｔｅ－ ｎｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＸＡＶ９３９ ａｎｄ ａｇｏｎｉｓｔ ＳＫＬ２００ １ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｒｅｇｕｌａｔｅ Ｗｎｔ／Ｂ－ｃａｔｅｎｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ． Ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＭＴＹ ａｓｓａｙ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔ．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｅｘ— ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ［３－ｃａｔｅｎｉｎ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ ｎｕｃｌｅｕｓ ａｎｔｉｇｅｎ（ＰＣＮＡ）ｗａｓ ａｓｓａｙｅｄ ｂｙ ｑＰＣＲ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ａｆｔｅｒ ｉｎｃｕｂａｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ２５ ｍｍｏｌ／Ｌ ｈｉ ｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅ ｆｏｒ ４８ ｈ，ｃａｒｄｉａｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａ— ｔｅｄ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｂ－ｃａｔｅｎｉｎ ｗａｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｎｉｇｉｆｃａｎｔｌｙ ｉｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ（Ｐ＜０．０１）； ＸＡＶ９３９ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｃａｒｄｉａｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ（Ｐ＜０．０１）ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｂ—ｃａｔｅｎｉｎ ［基金项目］国家自然科学基金（８１３０２８９２，８１１７３４５９，８１３７３５７５，８１２０２８４１）；广东省自然科学基金（￥２０１３０４００１６２２６，￥２０１３０１００１４７７７）；中国博士后基金 （２０１３Ｍ５３０３６３）；广州医科大学博士启动项目（２０１２Ｃ５０）；高等学校博士学科点专项科研基金（２０１２４４３３１１００１９） ”通信作者Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｍｈｏｏｌｖ＠１６３．ｃｏｍ；ｚｈｙｃｈｕｎ＠１２６．ｔｏｍ 网络出版时间：２０１４—０２—２６网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／５２．５０１２．Ｒ．２０１４０２２６．１３２７．０２９．ｈｔｍｌ ３０ １期 黄小芳等Ｗｎｔ／１３一连环蛋白在高糖诱导心肌成纤维细胞增殖中的作用 ａｎｄ ＰＣＮＡ（Ｐ＜０．０１）；ＳＫＬ２００１ ｃｏｕｌｄ ｒｅｓｉｓｔ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＸＡＶ９３９ ｉｎ ｃａｒｄｉａｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅ ｍａｙ ｂｅ ａｓｓｏｃｉ－ ａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｗｎｔ／１３－ｃａｔｅｎｉｎ ｐａｔｈｗａｙ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ；ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ；ｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅ；１３－ｃａｔｅｎｉｎ；ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ ｎｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｇｅｎ； ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ 心肌成纤维细胞（ｃａｒｄｉａｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ＣＦｓ）是 心脏主要构成细胞之一，具有较强增殖能力和对 外界刺激反应敏感性…。糖尿病中由于高糖的 持续作用能诱导ＣＦｓ的增殖，引起心肌纤维化， 进而出现心功能障碍，引发糖尿病心肌病（ｄｉａｂｅｔ— ｉｃ ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ，ＤＣＭ）并最终导致心衰的发 生 Ｊ。高糖诱导ＣＦｓ增殖是ＤＣＭ中最为关键的 病理过程之一，深人探索高糖诱导ＣＦｓ增殖的机 制对于防治糖尿病心肌病具有重要意义。Ｗｎｔ是 一类分泌型糖蛋白，通过自分泌或旁分泌发挥作 用。Ｂ一连环蛋白（ｐ—ｃａｔｅｎｉｎ）是经典Ｗｎｔ信号通 路上最重要的分子，它的稳定和核转位是经典 Ｗｎｔ信号激活的重要标志 Ｊ。目前研究表明， Ｗｎｔ／１３．ｃａｔｅｎｉｎ信号通路在心室重构以及转化生 长因子一ｐ（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ—ｐ，ＴＧＦ—Ｂ）诱 导ＣＦｓ的增殖中起了重要的作用 Ｊ。本研究将 采用高糖诱导ＣＦｓ增殖体外模型，运用Ｂ—ｃａｔｅｎｉｎ 抑制剂ＸＡＶ９３９以及激动剂ＳＫＬ２００１对Ｗｎｔ／１３． ｃａｔｅｎｉｎ在ＣＦｓ细胞增殖中的作用进行研究，探索 糖尿病心肌病的机制。 １材料和方法 １．１材料 １—３日龄Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）大鼠乳鼠由南 方医科大学实验动物中心提供，ＳＰＦ级，雌雄不限； 胶原酶ＩＩ、ＤＭＥＭ培养基、胎牛血清购自Ｇｉｂｃｏ公 司；二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）、ＸＡＶ９３９、Ｄ一葡萄糖、甘露 醇购自Ｓｉｇｍａ公司；ＭＴＦ购威佳生物公司； ＳＫＬ２００１购自Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司；Ｂ—ｃａｔｅｎｉｎ、ＧＡＰＤＨ兔 多克隆抗体购自ＣＳＴ公司；Ｔｒｉｚｏｌ、引物购自Ｉｎ— ｖｉｔｒｏｇｅｎ公司；逆转录试剂盒、实时荧光定量ＰＣＲ （ｑＰＣＲ）试剂盒购自Ｔａｋａｒａ公司。 １．２方法 １．２．１乳鼠ＣＦｓ的分离、培养无菌条件下，取１ —４日龄ＳＤ大鼠乳鼠心脏，Ｄ—Ｈａｎｋｓ液中洗去残 留血液，０．２５％胰蛋白酶４℃消化过夜。次日加入 等体积１０％ＤＭＥＭ完全培养基中和胰酶，去上清。 加人ｌ％胶原酶Ⅱ于３７℃旋转摇床上分次消化 （速率４００ ｒ／ｍｉｎ），每次１５ ｍｉｎ。待细胞消化成单 细胞悬液后进行差速贴壁９０ ｍｉｎ后去上清，加入 １０％ＤＭＥＭ继续培养，每３天传一代，实验采用２ ～４代细胞。 １．２．２ ＣＦｓ分组培养及ＭＩｑ＂法检测细胞活力 取对数生长的ＣＦｓ，胰酶消化调节细胞密度为２ Ｘ １０ ／ｍＬ，加入９６孔培养板中接种，每孑Ｌ ２００ ｉｘＬ，培 养２４ ｈ后换成２％ＤＭＥＭ细胞周期同步化１２～ ２４ ｈ。将ＣＦｓ分为：对照组（Ｃｏｎｔｒｏｌ，加入５．５ ｍｍｏｌ／ Ｌ葡萄糖及１９．５ ｍｍｏｌ／Ｌ甘露醇），高糖组（ＨＧ，加 人２５ ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖），Ｗｎｔ抑制剂组（ＸＡＶ９３９，加 入２５ ｍｍｏｌ／Ｌ高糖及１￣ｍｏｌ／Ｌ ＸＡＶ９３９），Ｗｎｔ抑 制剂加激动剂组（ＸＡＶ９３９＋ＳＫＩ２００１，加人２５ ｍｍｏｌ／Ｌ 高糖、１ Ｎ￣ｎｏｌ／Ｌ ＸＡＶ９３９、２０ ｔ￣ｎｏｌ／Ｌ ＳＫＩ２００１）。４８ ｈ 后去细胞上清，每孔加入１５０ ｔｚＬ含ＭＴＹ的ＤＭＥＭ 培养基，继续培养４ ｈ。吸弃培养液上清，每孔加入 ＤＭＳＯ１５０ ＩｘＬ，振荡混匀１０ ｍｉｎ，于５５０ ｎｍ处检测 ＯＤ值。细胞活力＝（空白组ＯＤ值一干预组ＯＤ 值）÷空白组ＯＤ值Ｘ １００％。 １．２．３细胞计数检测细胞增殖取对数生长的 ＣＦｓ，胰酶消化调节细胞密度为１ Ｘ １０ ／ｍＬ，加入６ 孔培养板中接种，每孑Ｌ １ ｍＬ，培养２４ ｈ后换成２％ ＤＭＥＮ细胞同步１２～２４ ｈ，加入不同的处理因素 ４８ ｈ后去细胞上清，胰酶消化细胞，８００转３ ｍｉｎ离 心细胞后弃上清，０．５ ｍＬ ＤＭＥＭ重悬细胞，显微镜 下细胞计数。 １．２．４ Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析预冷ＰＢＳ洗细胞２次， 加入２００ ｉｘＬ ＲＩＰＡ裂解液，冰上裂解５ ｍｉｎ，细胞刮 刮下细胞，１２ ０００ ｒ／ｍｉｎ低温离心１０ ｍｉｎ，弃沉淀。 ＢＣＡ法检测蛋白浓度，加入５ ＸＬｏｄｄｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ金属 浴９５℃５ ｍｉｎ蛋白变性，一８０℃冻存。取１５ ｇ 蛋白样品上样，用１ Ｘ Ｌｏｄｄｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ补至等体积， 然后进行电泳。电泳结束后，转移至ＰＶＤＦ膜上， ５％脱脂奶粉封闭１ ｈ，分别加入１３－ｃａｔｅｎｉｎ （１：１ ０００）、ＧＡＰＤＨ（１：５ ０００）４℃缓慢摇动过夜， ０．１％ＴＢＳＴ洗３次，加入ＨＲＰ标记的山羊抗兔 ３１ １期 黄小芳等Ｗｎｔ／［３一连环蛋白在高糖诱导心肌成纤维细胞增殖中的作用 咖 ：＿５Ｉ １．５ ．【ｊ｛｛： 鼍１．０ Ｚ 《０．５ Ｚ Ｕ 山 Ｏ．Ｏ Ｃｏｎｔｒｏｌ ＨＧ ＸＡＶ９３９ ＸＡＶ９３９＋ ＳＫＩＪ２００１ ‘ 与ＨＧ组比较Ｐ＜０．０５；‘ ’与ＸＡＶ９３９组比较Ｐ＜０．０５ 图３ ｑＰＣＲ检测ＣＦｓ中ＰＣＮＡ表达 Ｆｉｇ．３ Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＰＣＮＡ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｑＰＣＲ ３讨论 糖尿病是临床的常见病和多发病。随着我国 饮食结构的变化，糖尿病发病率日益升高，中国糖 尿病患者数占全球糖尿病患者总数的１／３；２０岁 以上的人群中，年龄标化的糖尿病患病率为 ９．７％，２型糖尿病患者发生心衰的概率为 １１．８％，是正常人的３倍；糖尿病的主要表现是血 糖升高，其重要并发症是ＤＣＭ，长期血糖升高可诱 导ＣＦｓ的过度增殖、表型转化以及细胞外基质失 衡，是ＤＣＭ心肌纤维化的病理基础 一 。因此，探 索高糖诱导ＣＦｓ增殖的机制对于阐明ＤＣＭ机理具 有重要的意义。 Ｗｎｔ／１３一ｃａｔｅｎｉｎ信号通路是细胞生长、分 化、迁移、粘附的重要途径，可分为经典通路和非经 典通路 Ｊ。Ｂ．ｃａｔｅｎｉｎ是经典通路的关键信号分 子。在非激活状态下，细胞浆中形成稳定的大肠腺 瘤息肉蛋白（Ａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓ ｐｏｌｙｐｏｓｉｓ ｃｏｌｉ，ＡＰＣ）、轴 蛋白（Ａｘｉｎ）、糖原合成酶激酶（ＧＳＫ．３１３）复合物， ｐ．ｃａｔｅｎｉｎ被ＧＳＫ－３［３磷酸化，磷酸化的ｐ—ｃａｔｅｎｉｎ 会被泛素一蛋白酶系统降解，使Ｗｎｔ信号通路被 抑制。当Ｗｎｔ分子与细胞膜表面受体Ｆｒｉｚｚｌｅｄ结 合后，散乱蛋白（Ｄｉｓｈｅｖｅｌｌｅｄ，ＤｖＭ）被磷酸化并 与ＡＰＣ结合，抑制ＧＳＫ－３［３的活性，使得Ｂ－ｃａｔｅ－ ｎｉｎ不能泛素化降解，引起￣－ｃａｔｅｎｉｎ在胞浆中积 累继而人核引起细胞内一系列反应 。Ｗｎｔ／［３－ ｃａｔｅｎｉｎ已被证实在心室重构中发挥重要作用，在 主动脉结扎心衰模型中，过表达Ｄｖｌ一１小鼠出现心 脏增加，心脏指数升高，射血分数下降 ；采用Ｗｎｔ 通路抑制剂Ｐｙｒｖｉｎｉｕｍ能抑制心肌缺血诱导的心室 重构并且增加心肌细胞的再生＿ｌ ；但是，Ｗｎｔ／１３－ ｃａｔｅｎｉｎ途径在ＤＣＭ动物模型或细胞模型中的作 用尚未见报道。有研究发现高糖能诱导肿瘤细胞 Ｗｎｔ／１５一ｃａｔｅｎｉｎ途径的激活，并认为高糖诱导的 Ｗｎｔ通路的激活可能是联系糖尿病与肿瘤之问的 潜在途径¨ 。本研究采用高糖诱导ＣＦｓ增殖体外 模型对Ｗｎｔ／１３．ｃａｔｅｎｉｎ途径在ＤＣＭ中的作用进行 了初步研究，发现高糖能诱导ＣＦｓ中１３－ｃａｔｅｎｉｎ含 量升高，这提示ＤＣＭ中可能存在Ｗｎｔ／ＩＢ—ｃａｔｅｎｉｎ途 径的激活。 ＸＡＶ９３９是端锚聚合酶（Ｔａｎｋｙｒａｓｅ，ＴＮＫＳ）的 小分子抑制物。ＴＮＫＳ具有降低Ａｘｉｎ表达的作用， ＸＡＶ９３９通过抑制ＴＮＫＳ，提高Ａｘｉｎ的含量，稳定 ＡＰＣ—Ａｘｉｎ．ＧＳＫ－３ｐ复合物，降低细胞内ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ 的水平 １２１。ＳＫＬ２００１是一种Ｗｎｔ通路的激动剂， 也被称为Ｗｎｔ激动剂ＩＩ。ＳＫＬ２００１通过影响Ａｘｉｎ 与ｐ．ｃａｔｅｎｉｎ的互相作用，进而减少ｐ．ｃａｔｅｎｉｎ的磷 酸化和泛素化降解，提高细胞内１３．ｃａｔｅｎｉｎ的含 量¨引。进一步采用Ｗｎｔ通路的抑制剂ＸＡＶ９３９和 激动剂ＳＫＬ２００１处理高糖诱导ＣＦｓ增殖体外模 型，细胞有丝的标志物ＰＣＮＡ作为观察指标， 深入研究Ｗｎｔ／［３一ｃａｔｅｎｉｎ途径在高糖诱导ＣＦｓ增殖 中的作用。研究发现，ＸＡＶ９３９能减少ＣＦｓ中１３． ｃａｔｅｎｉｎ的含量并抑制高糖诱导的ＣＦｓ增殖及ＰＣ— ＮＡ表达。ＳＫＬ２００１能拮抗ＸＡＶ９３９对Ｂ—ｃａｔｅｎｉｎ 的抑制作用，并且恢复ＣＦｓ的增殖表型，提高Ｐｃ— ＮＡ的表达，提示Ｗｎｔ／［３一ｃａｔｅｎｉｎ途径在高糖诱导 ＣＦｓ细胞增殖中起了重要的作用，Ｗｎｔ／［３一ｃａｔｅｎｉｎ通 路可能是防治ＤＣＭ的潜在治疗靶点。 ４参考文献 ［１］国荣，周娟，邓秀玲，等．心肌成纤维细胞在血管紧张 素Ⅱ作用中活性氧水平及ｐ２２ ｐｈｏｘ的表达［Ｊ］．南方 医科大学学报，２００９（２）：２０２—２０４． ［２］姚洁，马礼坤．糖尿病心肌病的发病机制及其诊治进展 ［Ｊ］．中国临床保健杂志，２０１２（２）：２１８—２２１． ［３］龚文颖，曾林祥．Ｗｎｔ信号通路与纤维化疾病关系的研 究进展［Ｊ］．天津医药，２０１３（９）：９３５—９３６． ［４］Ｍａｌｅｋａｒ Ｐ，Ｈａｇｅｎｍｕｅｌｌｅｒ Ｍ，Ａｎｙａｎｗｕ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｗｎｔ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｓ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｏｒ ｍａｌａｄａｐｔｉｖｅ ｃａｒｄｉａｃ ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ ａｎｄ ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｓ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ， ２０１０（４）：９３９—９４５． ［５］Ｃｈｅｎ ＪＨ，Ｃｈｅｎ ＷＬ，Ｓｉｄｅｒ ＫＬ，ｅｔ ａ１．Ｂｅｔａ．ｃａｔｅｎｉｎ ｍｅｄｉ． ３３ 贵阳医学院学报 ａｔｅｓ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ，ｔｒｎｓｆａｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－ ｂｅｔａ１一ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ａｏｒｔｉｃ ｖａｌｖｅ ３９卷 ａ ｐｏｔｅｎｔ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｗｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｗｏｕｎｄ ｒｅｐａｉｒ ａｎｄ ｐｏｓｔ－ＭＩ ｃａｒｄｉａｃ ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｐ ＬｏＳ Ｏｎｅ， ２０１０（１１）：１—１０． ｉｎｔｅｒｓｔｉｉｔｌａ ｃｅＨｓ［Ｊ］．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ，２０１１ （３）：５９０—５９７． ［１ １］Ｇａｒｃｉａ—Ｊｉｍｅｎｅｚ Ｃ，Ｇａｒｃｉａ—Ｍａｒｔｉｎｅｚ Ｊ Ｍ，Ｃｈｏｃａｒｒｏ—Ｃａｌｖｏ Ａ．ｅｔ ａ１．Ａ ｎｅｗ ｌｉｎｋ ｂｅｔｗｅｅｎ ｄｉａｂｅｔｅｓ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ：ｅｎ－ ［６］中华医学会糖尿病学分会．中国２型糖尿病防治指南 （２０１０年版）［Ｊ］．中国实用乡村医生杂志，２０１２（６）： ｌ一９． ｈａｎｃｅｄ ＷＮＴ／ｂｅｔａ－ｃａｔｅｎｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ｈｉｇｈ Ｓｌｕｃｏｓｅ［Ｊ］． Ｊ Ｍｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，２０１４（１）：５１－６６． ［７］Ｔｈｒａｉｎｓｄｏｔｔｉｒ Ｉ Ｓ，Ａｓｐｅｌｕｎｄ Ｔ，Ｔｈｏｒｇｅｉｓｒｓｏｎ Ｇ，ｅｔ １．Ｔｈｅ ａａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｓｌｕｃｏｓｅ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ ａｎｄ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ ［１２］Ｈｕａｎｇ Ｓ Ｍ，Ｍｉｓｈｉｎａ Ｙ Ｍ，Ｌｉｕ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｔａｎｋｙｒａｓｅ ｉｎｈｉ— ｂｉｉｔｏｎ ｓｔａｂｉｌｉｚｅｓ ａｘｉｎ ｎｄ ａａｎｔａｇｏｎｉｚｅｓ Ｗｎｔ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ［Ｊ］． Ｎａｔｕｒｅ，２００９（７２６４）：６１４—６２０． ｉｎ ｔｈｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ—ｂａｓｅｄ Ｒｅｙｋｊａｖｉｋ ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ｄｉｂｅｔａｅｓ Ｃａｒｅ，２００５（３）：６１２—６１６． ［１３］Ｇｗａｋ Ｊ，Ｈｗａｎｇ ＳＧ，Ｐａｒｋ Ｈ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ－ ｂａｓｅｄ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ａｘｉｎ／ｂｅｔａ—ｃａｔｅｎｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ［８］林治平，曾荣，胡资兵，等．Ｗｎｔ信号通路与骨髓间充质 干细胞神经分化［Ｊ］．广东医学，２０１１（８）：１０７７— １０７９． ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ，２０１２（１）：２３７—２４７． ［９］程华，孙芳玲，艾厚喜，等．Ｗｎｔ信号通路与血管发生研 究进展［Ｊ］．神经药理学报，２０１１（６）：６０—６３． ［１Ｏ］Ｓａｒａｓｗａｆｉ Ｓ，Ａｌｆａｒｏ Ｍ Ｐ，Ｔｈｏｒｎｅ Ｃ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｐｙｒｖｉｎｉｕｍ， （２０１４－０１－０９收稿） 中文编辑：文箐颍；英文编辑：周凌 （上接第２９页） Ｅ（ＰＧＥ２）和胶原酶，造成关节损伤；ＴＮＦ一 在活动 性ＲＡ中能提高血小板的活性和聚积，促进成纤维 细胞释放细胞黏附分子，而细胞黏附分子在ＲＡ的 发病中起着重要作用 』。本实验中，四大血高剂 量组与ＡＡ模型对照组相比，大鼠血清中ＴＮＦ一 及 究［Ｊ］．天津药学，２００４（２）：１—４． ［５］朱江，谢文丽，晋玉章，等．栀子对类风湿性关节炎大鼠 血清ＩＬ一１和ＴＮＦ一的影响［Ｊ］．中成药，２００５（７）：８０１— ８０３． ［６］Ｊａｃｏｂｓｏｎ ＰＢ，Ｂｏｒｇａｎ ＳＪ，Ｗｉｌｃｏｘ ＤＭ，ｅｔ ａ１．Ａ ｎｅｗ ｓｐｉｎ ｏｎ ａｎ ｏｌｄ ｍｏｄｅｌ：Ｉｎ ｖｉｖｏ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｓｅａｓｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｉｍａｇｉｎｇ ｗｉｔｈ ｒｅｓｐｅｃｔ ｔｏ ｓｔａｎｄａｒｄ ｉｎ— ＩＬ－１１３的含量显著降低（Ｐ＜０．０１）；四大血低、中剂 量组大鼠血清中ＴＮＦ—ｏ【、ＩＬ－１１３含量与ＡＡ模型对 照组相比差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），提示四大 血可能通过下调血清中ＴＮＦ－仅及ＩＬ一１ Ｂ的表达来 ｌｆａｍｍａｔｏｒｙ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ａｎｄ ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｉｎ ｔｈｅ ａｄｊｕｖａｎｔ ａｒｔｈｒｉｔｉｃ ｒａｔ［Ｊ］．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ，１９９９（１Ｏ）：２０６０— ２Ｏ７３． 抑制滑膜细胞增生，减少黏附分子等炎性分子的释 放，从而减缓ＲＡ的关节肿胀症状。 ［７］Ｓｈｉｍｏｎ Ｓａｋａｇｎｃｈｉ，Ｎｏｒｉｋｏ Ｓａｋａｎｃｇｈｉ．Ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓ— ｔｅｍ［Ｊ］．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００５（６）：５８９ ４参考文献 ［１］张玲玲，沈玉先，魏伟．类风湿性关节炎动物模型与临 床关系［Ｊ］．中国药理学通报，２００２（５）：５０２—５０６． —５９４． ［８］Ｈｕ Ｗ，Ｘｉａ ＬＪ，Ｃｈｅｎ ＦＨ，ｅｔ ａｌ，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｅｎ— ｄｏｓｔａｔｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ａｄｊｕｖａｎｔ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｂｙ ｄｏｗｎ—ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ＶＥＧＦ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦ－Ｏｆ．，ＩＬ一１ Ｂ ｐｒｏ— ［２］田振华，谢达莎，包雪爱，等．苗医验方“四大血”抗炎、 镇痛作用研究［Ｊ］．中国民族医药杂志， ２０１２（８）：４５—４８． ｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１２（８）：８２７— ８３５． ［９］张良，白人骁．细胞因子与类风湿性关节炎治疗新进展 ［Ｊ］．中国医药导报，２００８（１１）：２７． （２０１３—１２—１３收稿，２０１３—１２－２１修回） 中文编辑：文箐颍；英文编辑：周凌 ［３］赵太平，邱佰房，徐玉东，等．雷公藤治疗大鼠类风湿性 关节炎的效果及其免疫机制［Ｊ】．广东医学， ２０１１（２）：２６４１． ［４］冯芳，丁志建，刘俊．佐剂性关节炎大鼠模型的实验研
